帶狀皰疹動物模型構(gòu)建

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更新時間：2025-06-26 17:12:24
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一、帶狀皰疹動物模型構(gòu)建實驗動物選擇

1. 常用動物及特點

動物模型	優(yōu)點	缺點	適用研究
豚鼠（Guinea Pig）	對VZV敏感，可潛伏感染	癥狀較輕，不易自發(fā)再激活	潛伏感染模型
恒河猴（Rhesus Macaque）	接近人類VZV感染	成本高、倫理限制	疫苗/抗病du藥評估
人源化小鼠（huNSG）	可感染人VZV	免疫系統(tǒng)不完整	病毒-宿主互作研究
大鼠（Rat）	可誘導(dǎo)神經(jīng)痛	不自然感染VZV	帶狀皰疹后神經(jīng)痛（PHN）模型

2. 選擇依據(jù)

研究潛伏感染 → 豚鼠或 恒河猴
研究神經(jīng)痛 → 大鼠（非感染模型）
研究免疫逃逸 → 人源化小鼠

二、帶狀皰疹動物模型構(gòu)建病毒株準(zhǔn)備

1. 常用VZV毒株

臨床分離株（如Oka株、Ellen株）
實驗室適應(yīng)株（如VZV-32、pOka）
重組熒光報告病毒（如VZV-ORF66-GFP）

2. 病毒擴(kuò)增與滴定

細(xì)胞培養(yǎng)：

使用 人胚胎成纖維細(xì)胞（HEF） 或 MeWo細(xì)胞 擴(kuò)增VZV。
37℃培養(yǎng)，觀察CPE（合胞體形成）。

病毒純化：超聲破碎感染細(xì)胞釋放病毒。
病毒滴度測定：

噬斑試驗（PFU/mL）
qPCR檢測病毒DNA拷貝數(shù)

三、感染途徑與劑量

1. 感染方式

途徑	方法	適用模型	特點
皮下接種	足墊或背部注射	豚鼠、恒河猴	模擬原發(fā)感染
鼻腔接種	滴鼻感染	人源化小鼠	呼吸道感染
神經(jīng)節(jié)直接注射	脊柱旁或三叉神經(jīng)節(jié)注射	大鼠（非VZV模型）	模擬神經(jīng)痛

2. 感染劑量

豚鼠：10?–10? PFU（皮下）
恒河猴：10? PFU（靜脈/氣管）
人源化小鼠：103–10? PFU（鼻腔）

四、模型評估指標(biāo)

1. 病毒感染與復(fù)制

病毒載量檢測（qPCR檢測VZV DNA）

背根神經(jīng)節(jié)（DRG）、肺、脾組織

病毒抗原檢測（免疫組化/免疫熒光）

2. 潛伏感染與再激活

潛伏期檢測：

原位雜交檢測VZV潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄本（如ORF63）

再激活誘導(dǎo)：

免疫抑制（如環(huán)lin酰胺）
紫外線照射（模擬應(yīng)激）

3. 神jing病理學(xué)與疼痛行為

組織病理：

DRG炎癥、神經(jīng)元損傷（HE染色）

疼痛評估（大鼠PHN模型）：

機(jī)械痛覺過敏（Von Frey纖維）
熱痛覺過敏（Hargreaves試驗）

4. 免疫應(yīng)答

體液免疫：ELISA檢測VZV IgG
細(xì)胞免疫：

IFN-γ ELISPOT（VZV特異性T細(xì)胞）
流式檢測CD4?/CD8? T細(xì)胞

五、注意事項

1. 生物安全

VZV需在 BSL-2 實驗室操作，恒河猴實驗需 BSL-3（若用高劑量）。

2. 動物福利

設(shè)置 人道終點（如體重下降>20%、嚴(yán)重神經(jīng)癥狀）。
疼痛模型需倫理審批（如大鼠PHN實驗）。

3. 對照設(shè)置

陰性對照：未感染/PBS組
陽性對照：已知致病株（如Oka株）

六、常見問題與優(yōu)化

1. 豚鼠模型潛伏但不自發(fā)再激活

解決方案：

免疫抑制（如潑ni松龍）
神經(jīng)損傷（坐骨神經(jīng)結(jié)扎）

2. 人源化小鼠感染效率低

優(yōu)化方案：

提高感染劑量（10? PFU）
使用 人CD34+造血干細(xì)胞重建小鼠

3. 大鼠PHN模型不涉及VZV

替代方案：

HSV-1感染模型（部分模擬VZV神經(jīng)痛）
脊神經(jīng)結(jié)扎（SNL）（純機(jī)械痛模型）

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