chinese中国人妻4p对白视频_精人妻无码一区二区三区伊人直播_小sao货水好多真紧h无码视频_成熟女人毛片www免费版在线_午夜精品久久久久久久爽_正阳门下小女人演员表_秘书激情办公室在线观看_乱码丰满人妻一二三区_裸体做爰xxxⅹa高潮喷水

咨詢電話

15221734409

當(dāng)前位置：首頁   >  實(shí)驗(yàn)服務(wù)  >  轉(zhuǎn)基因疾病模型 > 細(xì)胞基因編輯

細(xì)胞基因編輯

簡要描述：細(xì)胞基因編輯服務(wù)：基因編輯技術(shù)在細(xì)胞層面的應(yīng)用（如腫瘤細(xì)胞系、原代細(xì)胞、iPSCs等）是研究基因功能、疾病機(jī)制和藥物篩選的核心手段

  • 更新時(shí)間：2025-06-26 17:27:41
  • 訪  問  量：33

詳細(xì)介紹

一、細(xì)胞基因編輯服務(wù)選擇與適用場景

技術(shù)編輯類型效率適用場景
CRISPR-Cas9敲除/短片段插入高基因KO、報(bào)告基因敲入
堿基編輯（ABE/BE）單堿基轉(zhuǎn)換中SNP糾正（如C→T或A→G）
Prime Editing精準(zhǔn)插入/缺失低-中復(fù)雜突變（無需DSB）
CRISPRa/i基因激活/抑制-表觀調(diào)控研究

二、細(xì)胞基因編輯服務(wù)CRISPR-Cas9基因敲除（KO）流程

1. gRNA設(shè)計(jì)

  • 工具推薦：

  • 設(shè)計(jì)原則：

    • 靶向s個(gè)編碼外顯子（確保移碼突變）。

    • 避免脫靶（使用CRISPRoff預(yù)測）。

2. 載體選擇

  • 質(zhì)粒系統(tǒng)：

    • lentiCRISPRv2（帶Puromycin抗性）。

  • RNP系統(tǒng)：

    • Cas9蛋白 + sgRNA（高編輯效率，低脫靶）。

3. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染/轉(zhuǎn)導(dǎo)
細(xì)胞類型遞送方法條件
HEK293T脂質(zhì)體（Lipo3000）70%密度，24h后換液
原代T細(xì)胞電轉(zhuǎn)（Neon系統(tǒng)）1600V, 10ms, 3 pulses
iPSCs慢病毒（低MOI）加Polybrene（8 μg/mL）
4. 篩選與驗(yàn)證

  • 抗生素篩選：

    • Puromycin（1-5 μg/mL，48-72h）。

  • 基因型鑒定：

    • T7E1/Surveyor assay：快速檢測Indel。

    • Sanger測序：TA克隆后分析突變類型。

  • 功能驗(yàn)證：

    • Western blot（蛋白水平敲除）。

三、基因敲入（KI）與點(diǎn)突變（PM）

1. HDR介導(dǎo)的敲入

  • 供體設(shè)計(jì)：

    • ssODN（100-200 nt）：同源臂40-60 nt + 插入序列。

    • 質(zhì)粒供體：需1 kb同源臂（適合大片段插入）。

  • 增強(qiáng)HDR：

    • 添加RS-1（終濃度7.5 μM）或NU7026（DNA-PK抑制劑）。

2. 堿基編輯（C→T或A→G）

  • 系統(tǒng)選擇：

    • BE4max（C→T）：窗口位點(diǎn)4-8。

    • ABE8e（A→G）：窗口位點(diǎn)4-7。

  • 轉(zhuǎn)染條件：

    • 質(zhì)粒或RNP（72h后檢測效率）。

3. Prime Editing

  • PE2/PE3系統(tǒng)：

    • pegRNA設(shè)計(jì)需包含RT模板和PBS序列（使用PE-Designer）。

四、原代細(xì)胞與難轉(zhuǎn)染細(xì)胞優(yōu)化

挑戰(zhàn)解決方案
低轉(zhuǎn)染效率電轉(zhuǎn)優(yōu)化（如原代B細(xì)胞用Amaxa Nucleofector）
高毒性使用RNP（比質(zhì)粒更溫和）
克隆形成率低流式分選（GFP報(bào)告系統(tǒng)）或有限稀釋法

五、質(zhì)量控制與脫靶分析

1. 編輯效率檢測

  • NGS：擴(kuò)增靶位點(diǎn)后深度測序（>10,000X）。

  • 流式細(xì)胞術(shù)：若插入報(bào)告基因（如GFP）。

2. 脫靶評(píng)估

  • 預(yù)測工具：

  • 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證：

    • 全基因組測序（WGS）或GUIDE-seq。

六、經(jīng)典應(yīng)用案例

編輯類型應(yīng)用案例
TP53 KO腫瘤細(xì)胞增殖研究驗(yàn)證p53在化療耐藥中的作用
BCL11A增強(qiáng)子編輯胎兒血紅蛋白再激活鐮刀型貧血治療研究
ROS1 G2032R KI靶向藥物耐藥模型克唑替尼耐藥機(jī)制探索


產(chǎn)品咨詢

留言框

  • 產(chǎn)品：

  • 留言內(nèi)容：

  • 您的單位：

  • 您的姓名：

  • 聯(lián)系電話：

  • 常用郵箱：

  • 詳細(xì)地址：

  • 驗(yàn)證碼：

掃碼關(guān)注

郵箱：[email protected]

地址：上海市寶山區(qū)長江南路180號(hào)長江軟件園B650

版權(quán)所有© 伊萊博生物科技（上海）有限公司 All Rights Reserved    備案號(hào)：滬ICP備2021016661號(hào)-1     sitemap.xml    管理登陸    技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng)    

滬公網(wǎng)安備 31011302006672號(hào)